Rekombinante proteinantigener har ofte flere forskjellige epitoper, hvorav noen er sekvensepitoper og noen er strukturelle epitoper.Polyklonale antistoffer oppnådd ved å immunisere dyr med denaturerte antigener er blandinger av antistoffer som er spesifikke for individuelle epitoper og kan generelt brukes til å påvise naturlige strukturer eller denaturerte målproteiner.En sidegevinst ved å bruke denaturerte proteiner som immunogener er at denaturerte proteiner har en tendens til å være mer immunogene og kan stimulere en sterk immunrespons hos dyr.
Ekspresjonssystemet til Escherichia coli er vanligvis valgt for antigene formål fordi det er det mest kostbare systemet når det gjelder tid og penger.For å forbedre muligheten for målproteinekspresjon og bekvemmeligheten av rensing, uttrykkes noen ganger bare et lite fragment av målproteinet, slik som et spesifikt domene.
Den tredimensjonale strukturen til proteiner
Det spesifikke domenet til et protein
Hvis formålet med antistoffpreparering kun er for wb-deteksjon, er det økonomisk og raskt å bruke syntetisk lite peptid som antigen, men det er en risiko for svak immunogenisitet eller ikke-regenisitet på grunn av upassende valg av peptidsegment.Siden antistoffpreparering krever en lang periode, velges ofte to eller tre forskjellige peptidsegmenter for å fremstille antistoffer ved bruk av polypeptidantigen for å sikre suksessraten for eksperimentet.
Renheten til polypeptidantigenet for immunisering må være større enn 80 %.Selv om en høyere renhet teoretisk kan oppnå antistoffer med bedre spesifisitet, produserer dyr i praksis alltid et stort antall ikke-spesifikke antistoffer, og maskerer dermed fordelene med antigenrenhet.
I tillegg må fremstillingen av antistoffer fra små peptider kryssbindes til det passende bæreantigenet for å øke immunogenisiteten.To vanlige antigene bærere er KLH og BSA.
Innleggstid: 23. mars 2023