De mest utsatt for HPLC-feil og -løsninger

Som et høypresisjonsinstrument kan HPLC lett føre til noen plagsomme små problemer dersom det ikke betjenes på riktig måte under bruk.Et av de vanligste problemene er kolonnekomprimeringsproblemet.Hvordan raskt feilsøke en defekt kromatograf.HPLC-systemet består hovedsakelig av en reservoarflaske, en pumpe, en injektor, en kolonne, et kolonnetemperaturkammer, en detektor og et databehandlingssystem.For hele systemet er pilarene, pumpene og detektorene nøkkelkomponentene og hovedlokasjonene som er utsatt for problemer.

Nøkkelen til kolonnetrykk er området som trenger nøye oppmerksomhet ved bruk av HPLC.Stabiliteten til kolonnetrykket er nært knyttet til kromatografisk toppform, kolonneeffektivitet, separasjonseffektivitet og retensjonstid.Kolonnetrykkstabilitet betyr ikke at trykkverdien er stabil ved en stabil verdi, men snarere at trykkfluktuasjonsområdet er mellom 345kPa eller 50PSI (som tillater bruk av gradienteluering når kolonnetrykket er stabilt og sakte endres).For høyt eller for lavt trykk er et kolonnetrykkproblem.

De mest utsatt for HPLC-feil og -løsninger

1, er høyt trykk det vanligste problemet ved bruk av HPLC.Dette betyr en plutselig økning i trykket.Generelt er det følgende årsaker: (1) Generelt skyldes dette blokkering av strømningskanal.På dette tidspunktet bør vi undersøke det stykkevis.en.Først må du kutte av innløpet til vakuumpumpen.På dette tidspunktet ble PEEK-røret fylt med væske slik at PEEK-røret var mindre enn løsemiddelflasken for å se om væsken dryppet etter ønske.Hvis væsken ikke drypper eller drypper sakte, er løsemiddelfilterhodet blokkert.Behandling: Bløtlegg i 30% salpetersyre i en halv time og skyll med ultrarent vann.Hvis væsken drypper tilfeldig, er løsemiddelfilterhodet normalt og blir kontrollert;b.Åpne renseventilen slik at den mobile fasen ikke passerer gjennom kolonnen, og hvis trykket ikke reduseres vesentlig, blokkeres det hvite filterhodet.Behandling: Filtrerte whiteheads ble fjernet og sonikert med 10% isopropanol i en halv time.Forutsatt at trykket faller under 100PSI, er det filtrerte hvite hodet normalt og blir kontrollert;c.Fjern utgangsenden av kolonnen, hvis trykket ikke synker, blokkeres kolonnen.Behandling: Hvis det er en buffersaltblokkering, skyll 95 % til trykket er normalt.Hvis hindringen er forårsaket av noe mer bevart materiale, bør en sterkere strømning enn den nåværende mobile fasen brukes for å skynde seg mot normalt trykk.Hvis det langsiktige rengjøringstrykket ikke synker i henhold til metoden ovenfor, kan innløpet og utløpet av kolonnen anses å være koblet til instrumentet tvert imot, og kolonnen kan rengjøres med den mobile fasen.På dette tidspunktet, hvis kolonnetrykket fortsatt ikke er redusert, kan kolonneinngangssilplaten bare erstattes, men når operasjonen ikke er god, er det lett å føre til reduksjon av kolonneeffekten, så prøv å bruke mindre.Ved vanskelige problemer kan kolonnebytte vurderes.

(2) Feil innstilling av strømningshastighet: Riktig strømningshastighet kan tilbakestilles.

(3) Feil strømningsforhold: viskositetsindeksen for forskjellige proporsjoner av strømninger er forskjellig, og det tilsvarende systemtrykket til strømmen med høyere viskositet er også større.Hvis det er mulig, kan løsemidler med lavere viskositet erstattes eller tilbakestilles og klargjøres.

(4) Systemtrykk nulldrift: juster nullpunktet til væskenivåsensoren.

2, trykket er for lavt (1) er vanligvis forårsaket av systemlekkasje.Hva du skal gjøre: Finn hver tilkobling, spesielt grensesnittet i begge ender av kolonnen, og stram lekkasjeområdet.Fjern stolpen og stram eller for PTFE-filmen med passende kraft.

(2) Gassen kommer inn i pumpen, men trykket er vanligvis ustabilt på dette tidspunktet, høyt og lavt.Mer alvorlig, pumpen vil ikke være i stand til å absorbere væsken.Behandlingsmetode: åpne renseventilen og rengjør med en strømningshastighet på 3~5ml/min.Hvis ikke, ble luftbobler aspirert ved eksosventilen ved hjelp av et dedikert nålrør.

(3) Ingen mobil fase utstrømning: sjekk om det er en mobil fase i reservoarflasken, om vasken er nedsenket i den mobile fasen, og om pumpen går.

(4) Referanseventilen er ikke stengt: Referanseventilen er stengt etter retardasjon.Det går vanligvis ned til 0,1.~ 0,2mL/min etter lukking av referanseventilen.

Sammendrag:

I denne artikkelen analyseres kun vanlige problemer innen væskekromatografi.Selvfølgelig, i vår praktiske anvendelse, vil vi møte flere andre problemer.Ved feilhåndtering bør vi følge følgende prinsipper: bare endre én faktor om gangen for å bestemme forholdet mellom den hypotetiske faktoren og problemet;Generelt, når vi bytter deler for feilsøking, bør vi være oppmerksom på å sette de demonterte intakte delene tilbake på plass for å forhindre avfall;Å danne en god rekordvane er nøkkelen til suksess med feilhåndtering.Avslutningsvis, når du bruker HPLC, er det viktig å være oppmerksom på prøveforbehandling og riktig drift og vedlikehold av utstyret.